Ученым и техническим специалистам часто необходимо рассчитывать концентрацию клеток в суспензии. Например, когда пациент получает кровь в кабинете врача, лаборатория может использовать определенные методы для определения количества лейкоцитов в данном объеме крови. Это дает врачу много информации о состоянии здоровья ее пациента, особенно о его иммунной системе, и о том, борется ли он с инфекцией или другим заболеванием. Подобные анализы могут выявить многие другие клетки крови, а также спинномозговую жидкость и другие биологические жидкости, например, количество сперматозоидов в сперме в целях фертильности. Ученые также рассчитывают концентрацию в клетках бактерий, дрожжей и других микроорганизмов для различных целей - от экологических исследований до промышленных технологий. Один из наиболее распространенных методов также преподается во многих классах биологии колледжа, и он использует устройство, называемое счетной камерой.
Прежде чем клеточная суспензия попадет в счетную камеру, ей может потребоваться разбавление, поскольку она может содержать тысячи или миллионы клеток. В этом случае клетки не могут быть разумно подсчитаны. Чтобы разбавить образец, используйте стерильную пипетку, чтобы поместить десять микролитров раствора клеток в пробирку, содержащую 90 микролитров разбавителя. Тип разбавителя будет зависеть от типа клетки. Хорошо перемешайте. Этот раствор теперь разбавлен в десять раз больше, чем исходный образец, поэтому его коэффициент разбавления составляет 10-1, Пометьте это. Повторите это несколько раз, используя стерильную пипетку каждый раз, пока раствор не станет достаточно разбавленным. Если вы разбавили его во второй раз, вторая пробирка была в 100 раз более разбавленной, чем исходный раствор, поэтому коэффициент разбавления составлял 10-2 и так далее.
Возможно, вам придется попробовать несколько разведений, чтобы определить правильный коэффициент разбавления для счетной камеры. Счетная камера представляет собой очень маленькую прозрачную прямоугольную коробку с точной глубиной и точной решеткой, вписанной сверху. Он также известен как гемоцитометр или иногда гемоцитометр. Цель состоит в том, чтобы суспензия была достаточно разбавленной, чтобы при ее просмотре в счетной камере ячейки не перекрывались, и они равномерно распределялись по сетке. Пипетируйте разведенную суспензию, содержащую клетки, в лунку счетной камеры, где она будет оседать в решетчатой камере посредством капиллярного воздействия Поместите счетную камеру на столик микроскопа и осмотрите его при низкой мощности.
Сетка содержит квадраты, которые сделаны из еще меньших квадратов. Выберите примерно четыре или пять квадратов, или столько, сколько вам нужно, чтобы сосчитать не менее 100 ячеек в выбранном вами шаблоне, таком как четыре угла и центральный квадрат. Если ячейки большие, это могут быть большие квадраты, но если ячейки маленькие, вместо этого вы можете выбрать меньшие квадраты.
Конкретный объем каждого квадрата сетки может варьироваться в зависимости от изготовителя счетной камеры, но часто глубина камеры составляет 0,1 миллиметра, площадь больших квадратов составляет 1 квадратный миллиметр, а площадь меньших квадратов составляет 0,04 квадратных миллиметра. Большие квадраты имеют объем 0,1 куб. Мм. Для этого примера предположим, что вы подсчитали 103 клетки в пяти квадратах и разводили исходный образец до тех пор, пока коэффициент разбавления не достиг 10-2.
Если каждый квадрат сетки имел объем 0,1 кубического миллиметра и было подсчитано пять, то общий объем подсчитанной камеры составлял 0,5 кубического миллиметра, и было 103 ячейки. Удвоение до 1 кубического миллиметра позволило бы получить 206 ячеек. Один кубический сантиметр эквивалентен 1 миллилитру, что является полезным измерением для жидкостей. В кубическом сантиметре 1000 кубических миллиметров. Следовательно, если бы в суспензии был кубический сантиметр или миллилитр, вы бы насчитали 206 000 (206 x 1000) клеток. Вот как это выглядит как уравнение:
Объем квадрата сетки × количество подсчитанных квадратов = общий объем подсчитанной суспензии
Количество клеток ÷ объем подсчитанной суспензии = количество клеток на миллиметр в кубе
Количество клеток на миллиметр в кубике × 1000 = количество клеток на миллилитр
Вам нужно будет учесть любое проведенное разведение, чтобы исходный раствор можно было считать под микроскопом. В этом примере коэффициент разбавления равен 10-2, Для расчета начальной концентрации раствора:
Количество клеток на миллилитр ÷ коэффициент разбавления = концентрация клеток
В этом примере количество клеток на миллилитр составляет 206 000, и делится на 10-2 (0,01) дает концентрацию клеток 20 600 000 клеток на миллилитр в исходном образце.