Содержание
- Как работает гель-электрофорез
- Основная процедура электрофореза
- Определение длины неизвестных фрагментов
Когда дело доходит до измерения длины фрагментов ДНК, которые намного меньше, чем клетки, микробиологам нужен трюк, и наиболее удобным является гель-электрофорез. Этот метод основан на том факте, что фрагменты ДНК заряжены, и он является альтернативой более дорогим методам, таким как рентгеновская кристаллография, которая была ответственна за открытие структуры двойной спирали ДНК.
Как работает гель-электрофорез
Поскольку молекулы ДНК заряжены, на них воздействует электрический ток. Когда вы помещаете их в нейтральный гель и проводите ток через гель, молекулы мигрируют в направлении положительного электрода (анода). Поскольку молекулы ДНК разных размеров несут одинаковый заряд, меньшие перемещаются быстрее, поэтому этот процесс разделяет молекулы на полосы, которые можно сравнить с образцами известных размеров.
Основная процедура электрофореза
Гель обычно изготавливают из агарозы, полисахарида, который при нагревании в буферном растворе образует полутвердый, слегка пористый гель. На одном конце гель образует крошечные углубления, называемые лунками, где исследователь помещает исследуемые образцы ДНК вместе с эталонными образцами известной длины, называемыми лестницей ДНК. Длины фрагментов лестницы были предварительно определены другим методом, таким как рентгеновская кристаллография.
Когда гель погружают в проводящий раствор и прикладывают напряжение, осколки начинают мигрировать через гель - сначала меньшие, а сзади более крупные. Они в конечном счете формируют себя в подобные полосе спектра согласно размеру.
Как только это происходит, исследователь выключает питание, наполняет гель красителем, связывающим DVA, и исследует образцы в ультрафиолетовом свете. Используя лестницу в качестве эталона, исследователь может определить размер каждого из фрагментов в видимой полосе. Видны только полосы - отдельные фрагменты ДНК слишком малы, чтобы видеть.
Определение длины неизвестных фрагментов
Скорее всего, не каждая полоса в образце соединяется с полосой на лестнице, поэтому для определения размеров этих неизвестных фрагментов ученые обычно строят график. На оси абсцисс - расстояние, пройденное каждой полосой в лестнице в миллиметрах, а на оси ординат - размер каждой полосы. Когда точки соединены кривой, размер любой полосы можно экстраполировать из кривой после измерения расстояния, пройденного этой полосой в миллиметрах.