Содержание
- Разведение образцов, нанесение покрытия и инкубация
- Ручной подсчет
- Автоматический подсчет
- Делая подсчет более сложным
Одним из классических способов определения концентрации микробов в пробе является разбавление пробы, выращивание микробов на чашках и подсчет колоний. Посевные микробы вырастают из колониеобразующей единицы, состоящей из одной или нескольких клеток, в видимую колонию, которую можно увидеть и сосчитать. Бактерии являются наиболее распространенным микробом для оценки с помощью подсчета пластин. Подсчет колоний используется для обнаружения и подсчета микробов в почве, воде и пище. Протоколы подсчета колоний подчеркивают точный и методичный подход.
Разведение образцов, нанесение покрытия и инкубация
Если вы просто размажете образец микроба на чашке с агаром, вы увидите так много колониеобразующих единиц, что отдельные колонии будут смешиваться вместе, делая невозможным их подсчет. Чтобы решить эту проблему, смешайте образец с жидкой средой, возьмите небольшое количество этой смеси и еще раз разбавьте ее. Повторите этот процесс от шести до 10 раз. Распределите окончательное разведение на чашке с агаром и инкубируйте его в течение четырех-семи дней перед подсчетом колоний.
Ручной подсчет
Основной трюк в подсчете колоний - подсчитать каждую точку колонии один раз. Один из подходов состоит в том, чтобы установить чашку Петри на фоне сетки и подсчитать колонии в каждой ячейке сетки, перемещаясь в методической схеме через все ячейки. Маркировка подсчитанных колоний на обратной стороне чашки Петри также может быть полезным подходом. Как правило, вам нужно насчитать не менее трех пластин; Для того, чтобы сделать надежные выводы, используйте только чашки, содержащие от 30 до 300 колоний, предполагает Microbiology Network, фирма, предоставляющая консультационные услуги лабораториям и производителям. Планшеты с колониями, которые слишком многочисленны для подсчета или имеют слишком мало колоний, необходимо повторно высевать из нового разведения.
Автоматический подсчет
Человеческая ошибка добавляет время, необходимое для подсчета колоний вручную. Чтобы повысить точность и эффективность, поместите чашку Петри в автоматическое устройство подсчета колоний. Автоматические счетчики колоний принимают изображение блюда, отделяют колонии от фона, а затем используют алгоритм для подсчета колоний на чашке. Алгоритмы могут испытывать трудности при различении колоний, когда две или более колонии соприкасаются по краям, поэтому это область постоянной разработки программного обеспечения.
Делая подсчет более сложным
Точность расчета плотности микробов по количеству колоний имеет некоторые ограничения. Колониеобразующие единицы могут быть отдельной клеткой, цепочкой клеток или целым скоплением клеток. Предполагается, что колония представляет собой одну клетку, поэтому концентрации, рассчитанные по количеству колоний, могут быть низкими. Разные микробы нуждаются в разных условиях роста, и колонии на чашке представляют только тех микробов, которые процветают на этой питательной среде в этих условиях инкубации. Кроме того, подсчет колоний не регистрирует мертвые клетки, что важно при необходимости концентрации клеток в исходном образце.