Содержание
Гель-электрофорез - это метод, используемый в лабораториях для измерения и сортировки нитей ДНК. Это необходимо, потому что ДНК в нормальных условиях слишком мала, чтобы манипулировать ею, даже если смотреть с помощью большинства микроскопов. Лаборатория гель-электрофореза использует относительно простую процедуру, и такая же базовая методика также может быть использована для разделения отдельных белков.
Гелевая матрица
Чтобы начать процедуру гель-электрофореза, сначала необходимо создать гель. Как правило, гели изготавливают в тонких листах с использованием вещества, называемого агарозой. Порошкообразную агарозу помещают в колбу, а затем в раствор с соленой водой, называемый буфером. Эту смесь агарозы и буфера нагревают до тех пор, пока два вещества не расплавятся вместе, а затем выливают в формовочную форму. Устройство, называемое гребнем, затем помещают на один конец формы до того, как гель остынет. Когда гель остынет, расческа удаляется, оставляя маленькие щели, которые будут использоваться для хранения образцов ДНК.
Особая характеристика охлажденной агарозной смеси (называемой гелевой матрицей) связана с тем, что она создается с помощью соленой воды. Когда электрифицировано, матрица станет проводящей, позволяя электричеству течь вдоль ее длины. Другим особым свойством гелевой матрицы является наличие регулярных микроскопических отверстий. Эти отверстия позволят нитям ДНК проходить через матрицу геля и облегчат процесс сортировки.
Камера для электрофореза
Ваш следующий шаг - создать камеру для электрофореза. Это небольшая прямоугольная коробка, соединенная положительным и отрицательным электрическим соединением на обоих концах. Камеры, как правило, мелкие, достаточно маленькие, чтобы поместиться на столе, и построены из прозрачных материалов, таких как оргстекло.
Раствор соленой воды выливают в дно камеры электрофореза, и гелевая матрица слегка погружается в этот раствор. Соленая вода служит двум целям: помогать потоку электричества и сохранять гелевую матрицу влажной. Поскольку ДНК приводится в движение отрицательным зарядом, разместите вашу матрицу так, чтобы ваши образцы находились рядом с вашим отрицательным электрическим соединением.
Подготовка ДНК
Образцы ДНК затем готовятся. Поскольку ДНК в растворе практически невозможно увидеть, к каждому отдельному образцу добавляется окрашивающий агент, называемый загрузочным буфером. Этот агент также сгущает раствор ДНК, делая его менее жидким и более работоспособным. Используя пипетку, перенесите образец раствора ДНК в каждую чередующуюся щель в матрице геля. В пустое место между каждым образцом поместите раствор ДНК, длина которого вам уже известна (так называемый стандарт ДНК), для контроля и сравнения эксперимента.
Включите питание
Теперь включите камеру для электрофореза. При отрицательной силе ваши образцы ДНК будут вытеснены по всей длине камеры. Маленькие нити ДНК будут проходить быстрее через матрицу геля, и за короткое время они отделятся от более длинных и медленных нитей. Краситель в красящем агенте позволяет вам следить за ДНК. Вы не сможете увидеть отдельные нити ДНК, но нити одинаковой длины будут слипаться.
Заключительные шаги
Когда ДНК отсортирована, матрица удаляется из камеры электрофореза. Затем ДНК окрашивают, чтобы облегчить измерение и исследование.