Содержание
Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) - это лабораторный метод, используемый для разделения и идентификации соединений. Это тип колоночной хроматографии, который использует различные полярности соединений в растворе для их разделения. ВЭЖХ отличается от стандартной колоночной хроматографии тем, что использует давление для более быстрого протекания раствора через колонку и, следовательно, дает более быстрые, а иногда и более точные результаты. Цель состоит в том, чтобы разделить соединения в колонке и сделать так, чтобы они выходили отдельно.
Coelution
Из-за скорости ВЭЖХ и зависимости от полярности соединений два соединения с одинаковой структурой и полярностью могут выходить из хроматографического устройства одновременно или почти одновременно. Это известно как coelution. Соэлюция затрудняет определение того, какая именно часть смеси элюируется в какой момент.
Адсорбированные соединения
ВЭЖХ обычно использует стеклянную колонку, заполненную шариками из разных материалов. Смеси, проталкиваемые через колонку, содержат химические вещества, которые с различной силой связываются с гранулами. Сила связывания, которая зависит от сходства по полярности, определяет, как долго химическое вещество будет связываться с шариком до его высвобождения. Некоторые соединения связываются так сильно, что по существу они никогда не высвобождаются из гранул в колонке и никогда не измеряются в растворе, выходящем из колонки.
Стоимость
Типичные лабораторные методы разделения включают разработку анализа или метода разделения, а затем внедрение этого анализа для отделения отдельных соединений от раствора. Однако это обычно приводит к множеству решений, которые также должны подвергаться процедурам, что приводит к экспоненциальному увеличению сложности. Хотя ВЭЖХ часто может упростить и ускорить этот процесс, стоимость разработки устройства ВЭЖХ может стать огромной. Разработка устройства для ВЭЖХ, хотя и намного более эффективная, является гораздо более дорогостоящей, чем разработка других анализов для разделения соединений. Это делает его финансово невыгодным для многих небольших частных лабораторий.
сложность
ВЭЖХ используется не только для разделения простых соединений, но и для выделения специфических белков из клеточной смеси. В этом случае шарики в колонке обычно покрыты антителом, специфичным для белка, который необходимо собрать. Белки связывают антитела, а оставшийся раствор пропускают через колонку, затем белки высвобождают с использованием другого раствора и собирают. Для этого требуется, чтобы высококвалифицированный специалист постоянно следил за колонной и следил за тем, чтобы процесс работал точно так, как запланировано.