Фермент - это белок, который катализирует (увеличивает скорость) химических реакций. Оптимальная температура большинства ферментов или температура, при которой ферменты наилучшим образом способствуют реакциям, составляет от 35 до 40 градусов Цельсия. Повышение температуры в этом окне увеличивает скорость реакции, поскольку она возбуждает молекулы и увеличивает скорость, с которой ферменты / реагенты сталкиваются и реагируют, образуя продукт. Однако слишком сильное повышение температуры может денатурировать фермент и вообще мешать ему работать.
Определите оптимальную температуру фермента, нагревая реакцию до бесконечно малых количеств и отбирая небольшие образцы реакции, чтобы определить, когда достигается максимальная скорость продуцирования продукта.
Выберите метод. Определите, как вы собираетесь измерять концентрацию вашего продукта в различных точках эксперимента. Например, вы можете измерить концентрацию многих продуктов, используя спектрофотометр и рассчитывая концентрацию по оптической плотности, или измеряя флуоресценцию и вычисляя концентрацию по флуоресценции.
Настройте свой эксперимент. Поместите свои реагенты и фермент в небольшой контейнер с крышкой, такой как сцинтилляционный флакон. Реакция начнется. Поместите сцинтилляционный флакон в большой стакан с водой комнатной температуры. Поместите стакан на нагревательную плиту. Поместите термометр в стакан. Это позволяет измерять температуру реакции в различных точках.
Возьмите образец реакции 100 микролитров при комнатной температуре, около 25 градусов по Цельсию. Включите нагревательную плиту. При различных температурах от 30 до 40 градусов Цельсия (30,5, 31, 31,5 и т. Д.) Берут 100 микролитровых образцов вашей реакции.
Определите концентрацию вашего продукта при каждой температуре. Когда температура поднимется выше 40 градусов по Цельсию, вы увидите уменьшение скорости, с которой субстрат превращается в продукт, потому что фермент денатурирует. Точка, в которой продукт производится с максимальной скоростью, является точкой, в которой температура является оптимальной.