Содержание
Биохимия изучает молекулы, такие как ДНК, РНК и белки. Методы блоттинга - это то, что ученые используют для разделения этих типов молекул. В клетках они существуют как смесь. Блоттинг позволяет исследователям находить один белок среди многих, как иголка в стоге сена. Блоттинг обычно проводят, пропуская смесь ДНК, РНК или белка через слой геля. Этот гель позволяет маленьким молекулам двигаться быстрее, чем большие. Отделенные молекулы затем прижимаются к мембране, которая помогает перемещать молекулы из геля на мембрану. Молекулы прилипают к мембране, но остаются в том же месте, друг от друга, как если бы они все еще были в геле.
Вестерн-блот
Вестерн-блоттинг является распространенным методом разделения белков по размеру, но в виде прямых столбцов. Эти параллельные столбцы позволяют исследователям сравнивать количество белка в разных образцах, которые проходят рядом друг с другом, например, в дорожках для боулинга. Например, если вы тестировали влияние разных количеств препарата на рост клеток, вы бы обрабатывали четыре разных группы клеток разным количеством препарата. Затем вы можете разбить клетки и запустить белки каждой группы в отдельных дорожках на геле. Распределение белков таким образом позволяет увидеть, что увеличение концентрации лекарств делает с определенным белком.
Северное пятно
Нозерн-блоттинг используется для обнаружения РНК. Клетки могут быть взломаны, чтобы высвободить свою РНК. РНК из разных типов клеток может быть запущена на отдельных дорожках на геле. Гель распространяет различные РНК по размеру. Эти аккуратные, параллельные ряды РНК позволяют исследователю сравнивать, какой тип клеток имеет, какая часть какой РНК. Этот метод позволяет исследователю определить, имеют ли клетки определенного заболевания больше этой РНК или меньше этой РНК. Нозерн-блоттинг может показать, как болезнь работает на уровне производства РНК.
Саузерн-блот
Саузерн-блоттинг - это оригинальная техника блоттинга, которая запустила систему именования. Он был изобретен Эдвином Южным. Саузерн-блот используется для определения количества ДНК в смеси. Как и в случае с белком и РНК, ДНК клетки может быть освобождена, когда эта клетка взломана. Саузерн-блоттинг отделяет ДНК от разных типов клеток по размеру. ДНК из каждого образца распределяется в аккуратные, параллельные полосы. Отдельные кусочки ДНК можно обнаружить с помощью радиоактивного или флуоресцентного зонда, который предназначен для связывания только с этим кусочком ДНК. Энергетический сигнал от радиоактивного зонда или вспышки света от флуоресцентного сигнала говорят исследователям, сколько этого фрагмента ДНК содержится в каждом образце.
Другие помарки
Три основных метода блоттинга - западный, северный и южный - были изменены по-разному, чтобы обнаружить немного разные молекулы. Например, вестерн-блот против южного. обнаруживает белок и ДНК, соответственно. Каждый модифицированный метод обычно выполняется обычным способом, но использует другой метод для обнаружения молекулы, которая распространяется по параллельным линиям. Юго-западные пятна обнаруживают молекулы белка, прилипшие к ДНК. Северо-западные пятна обнаруживают молекулы белка, прилипшие к РНК. Дальневосточные пятна обнаруживают молекулы белка, прилипшие к другим белкам.