Содержание
Спектрофотометр используется для определения концентрации определенных соединений, таких как белок, в растворе. Как правило, свет проходит через кювету, заполненную образцом. Количество света, которое поглощается образцом, измеряется. Поскольку соединения поглощают свет в разных спектральных диапазонах, для анализа должна быть установлена правильная длина волны. Существует множество способов расчета концентрации неизвестных образцов с помощью спектрофотометрии, однако использование эталонных стандартов дает наилучшую точность. Кроме того, стандарты также указывают, является ли спектрофотометр неисправным или другие проблемы с анализом.
Расчет по уравнениям прямой
Анализируйте эталонные стандарты в начале анализа. Стандарты являются известными концентрациями и используются для калибровки оборудования и проверки точности. Все образцы должны попадать в рабочий диапазон стандартов. Если нет, то образцы необходимо будет разбавить или увеличить концентрацию стандартов.
Составьте точечную диаграмму или линейный график со стандартными показаниями концентрации и абсорбции. Концентрация будет на оси Y, поглощающая способность на оси X. Например, стандартами являются 1 ч / млн, 2,5 ч / млн и 5 ч / млн. Приведенная поглощающая способность составляла 1 ч / млн = 0,25, 2,5 ч / млн = 0,5 и 5 ч / млн = 0,75.
Отформатируйте линию тренда, чтобы отобразить уравнение на графике. Уравнение покажет формулу y = mx + b. Например, при использовании стандартов на шаге 2 уравнение имеет вид y = .1224x + 0.1531. Большинство линий тренда пересекаются в нуле, но это зависит от аналитического метода и значения R-квадрата.
Анализировать неизвестные образцы и записывать показания поглощения.
Используйте уравнение (y = mx + b) для определения концентрации образцов.
Понимание уравнения прямой
Пусть «Y» равна концентрации. Это то, что будет решено за.
Пусть «Х» равно поглощающей способности образца. Это поглощающая способность, измеренная спектрофотометром.
Разрешить «», чтобы равняться наклону, и «b», чтобы равняться y-перехват. Оба даны, однако, если линия тренда была пробита через 0, то «b» будет 0.
Решите для концентрации. Используя пример в шаге 3, замените «х» в качестве заданной поглощающей способности .563. Следовательно:
y = .1224 (.563) + 0,1531
у (концентрация) = .222011