Содержание
Спектрофотометрия - бесценный инструмент в химии и биологии. Основная идея проста: разные вещества лучше поглощают свет / электромагнитное излучение на некоторых длинах волн, чем на других. Вот почему некоторые материалы прозрачны, а другие окрашены, например. Когда вы пропускаете свет с определенной длиной волны через раствор, чем выше его концентрация, тем больше света он будет поглощать. Чтобы рассчитать концентрацию, вам нужно сравнить ваши показания с показаниями стандартов известной концентрации. Процедура, приведенная ниже, является довольно общей процедурой, написанной с учетом требований учебной лаборатории по химии, но ее можно изменить и для других настроек.
Как всегда, работая в лаборатории, наденьте защитные очки, перчатки и пальто с длинными рукавами, чтобы обеспечить собственную безопасность.
Сожмите резиновую лампочку, чтобы освободить ее от воздуха, затем поместите ее на градуированную пипетку и дайте лампочке расслабиться, чтобы она всасывала воду в пипетку. Затем удалите лампочку и закройте верхнюю часть пипетки пальцем; это заклеит пипетку так, что раствор внутри не вытечет, пока ваш палец не будет удален. Слегка приподнимите край пальца, чтобы небольшое количество раствора вытекло из пипетки, пока не достигнете желаемого объема. Потренируйтесь с небольшим количеством воды и стаканом, чтобы почувствовать, как работает градуированная пипетка. Ссылка в разделе «Ресурсы» содержит видеоклип, который покажет вам, как использовать пипетку, если вы никогда не работали с ней раньше.
Маркируйте 5 пробирок в качестве стандартов 1-5. Вы можете пометить их с помощью маскирующей ленты и ручки или маркера с сухим стиранием.
Выберите пять концентраций для ваших стандартов. Вы хотите, чтобы стандартные концентрации были отделены друг от друга примерно на одном и том же интервале - например, 0,1 моль, 0,2 моль, 0,3 моль и т. Д. - и примерно в том же диапазоне, который, как вы ожидаете, будет вашим неизвестным. В настоящее время используйте следующие пять концентраций, но помните, что вам нужно будет изменить их при проведении собственного эксперимента:
Стандарт 1: 0,1 моль Стандарт 2: 0,2 моль Стандарт 3: 0,3 моль Стандарт 4: 0,4 моль Стандарт 5: 0,5 моль
Затем возьмите 1-молярный стандартный раствор и добавьте следующие количества в пробирки 1-5. Помните, что эти суммы рассчитываются с использованием концентраций, перечисленных выше, поэтому вам может потребоваться изменить их по мере необходимости при проведении собственного эксперимента.
Стандарт 1: 0,8 миллилитра Стандарт 2: 1,6 миллилитра Стандарт 3: 2,4 миллилитра Стандарт 4: 3,2 миллилитра Стандарт 5: 4 миллилитра
Промойте градуированную пипетку, затем перенесите следующие количества деионизированной воды:
Стандарт 1: 7,2 миллилитра Стандарт 2: 6,4 миллилитра Стандарт 3: 5,6 миллилитра Стандарт 4: 4,8 миллилитра Стандарт 5: 4,0 миллилитра
По сути, идея состоит в том, чтобы довести количество раствора в каждой пробирке до 8 миллилитров.
Закройте каждую стандартную пробирку парафильмом и переверните, чтобы смешать.
Отметьте еще пять пробирок как «Неизвестный 1-5». Добавьте столько же вашего неизвестного или тестового раствора к каждому, сколько вы использовали с 1-мольным раствором для стандартов. Другими словами, неизвестный 1 будет содержать 0,8 миллилитра тестового раствора и 7,2 миллилитра воды, неизвестный 2 будет содержать 1,6 миллилитра тестового раствора и 6,4 миллилитра воды и так далее.
Закройте каждое из неизвестных парафильмом и осторожно переверните, чтобы смешать.
Включите спектрофотометр и дайте ему прогреться. Необходимое время будет зависеть от модели и производителя.
Установите длину волны на спектрофотометре. Длина волны будет зависеть от типа химического вещества в вашем эксперименте. Пока предположим 500 нм, хотя помните, что вам нужно будет изменить это для разных экспериментов.
Откалибруйте свой спектрофотометр. Процедура калибровки зависит от того, какое устройство вы используете. Для Spectronic 20, распространенной модели в учебных лабораториях, вы сначала отрегулируете аппарат так, чтобы он читал «0 процентов Т», когда кювета не загружена, а затем отрегулируйте его так, чтобы он читал «100% Т», когда пустая кювета, содержащая деионизированный вода только загружена. Эти процедуры могут различаться в зависимости от типа используемой машины, поэтому для получения подробной информации обратитесь к инструкции производителя.
После калибровки машины возьмите стандартную 1 пробирку и вылейте содержимое в чистую кювету, пока они не достигнут линии наполнения. Протрите кювету салфеткой, чтобы удалить пальцы или другие загрязнения. Вставьте кювету в спектрофотометр и запишите показания «% T».
Повторите эту процедуру для всех 10 образцов. Будьте уверены, чтобы очистить кювету между образцами, чтобы ваши результаты были максимально точными.
Возьмите результаты для ваших стандартов и введите их в программу для работы с электронными таблицами / графиками, например, Excel или OpenOffice.
Используя программу для работы с электронными таблицами, разделите 100 процентов на каждое из значений "% T" для стандартов, а затем запишите результат. Этот расчет даст вам поглощение. Если вы введете формулу, ваша программа для работы с электронными таблицами выполнит вычисления за вас.
Пример: если% T равен 50,6, формула, которую вы вводите в программу электронных таблиц, будет выглядеть следующим образом:
журнал (100 / 50,6)
Программа работы с электронными таблицами выполнит арифметику.
Сделайте то же самое для всех пяти неизвестных / экспериментальных значений.
График значений абсорбции для всех пяти стандартов, с концентрацией на оси X и абсорбции на оси Y. Используя программу для работы с электронными таблицами, подгоните линейное уравнение к этому графику. Уравнение будет иметь вид y = mx + b. Большинство программ электронных таблиц будут иметь функцию линейной регрессии. Обратитесь к руководству пользователя для вашей программы работы с электронными таблицами, чтобы узнать, как использовать функцию линейной регрессии.
Возьмите уравнение для линии наилучшего соответствия из вашей программы работы с электронными таблицами и решите его для y, вычтя b с обеих сторон и разделив обе стороны на m. Результат будет выглядеть следующим образом:
(у - б) / м = х
где b и m - значения, найденные вашей программой работы с электронными таблицами.
Проверьте значения абсорбции для неизвестных и выберите три, которые попадают в тот же диапазон, что и стандарты. Используйте эти три значения поглощения для ваших оставшихся расчетов. Если все пять попадают в тот же диапазон, что и стандарты, вы можете использовать все пять вместо этого, но вам нужно использовать как минимум три.
Подключите каждое из трех значений поглощения в уравнение вместо y. Помните, что ваше уравнение было в следующей форме:
(у - б) / м = х
Итак, вы захотите вставить значение абсорбции для каждого неизвестного в уравнение вместо y, а затем вычислить x. Вы можете использовать программу электронных таблиц, чтобы сделать этот расчет за вас и ускорить его. Теперь вы рассчитали концентрацию интересующего химического вещества в трех ваших разведенных неизвестных. Однако для приготовления этих неизвестных растворов исходный раствор разбавляли, поэтому теперь вам нужно работать в обратном направлении и рассчитывать концентрацию исходного раствора на основе коэффициента разбавления.
Каждый неизвестный образец, который вы вставили в спектрофотометр, разбавляли на разную величину. Следовательно, теперь вы должны разделить рассчитанную концентрацию на основе оптической плотности для каждого неизвестного показания следующим образом:
Неизвестный 1: разделить на 0,1 Неизвестный 2: разделить на 0,2 Неизвестный 3: разделить на 0,3 Неизвестный 4: разделить на 0,4 Неизвестный 5: разделить на 0,5
Помните, однако, что эти цифры основаны на предположении, что вы используете разведения, описанные выше. Не забудьте изменить эти значения, если вы разбавили образцы на другое количество.
Сложите свои результаты вместе и разделите их на количество результатов. Это даст вам среднее значение. Сообщите это число как ваш результат для концентрации исходного раствора.