Содержание
- Этилендиаминтетраацетат для очистки ДНК
- Magneisum Chloride для амплификации ДНК
- Этидий бромид для окрашивания ДНК
Анализ ДНК включает в себя различные виды молекулярных экспериментов и биологических процедур. ДНК - это хрупкое и сложное сырье, поэтому для его обработки и анализа требуется наилучшее качество и самое чистое приготовление химических веществ. В зависимости от анализа, сотни химических веществ, от кислых и основных растворов до буферов и красителей, участвуют в исследовании ДНК. Понимание того, почему используются некоторые химические вещества, является ключом к проведению успешных экспериментов и получению точных, надежных и воспроизводимых результатов.
Этилендиаминтетраацетат для очистки ДНК
Три вида ДНК очищаются для научной работы: ДНК из генома (геномная ДНК), вся ДНК из клетки (общая ДНК) или из плазмид, которые могут самножиться. Полная очистка ДНК клеток использует химические вещества, которые позволяют разрушать многие мембраны клеток во время лизиса клеток. Химический этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) часто используется для удаления ионов магния, которые необходимы для поддержания жесткости клеточных стенок, вызывая их ослабление до такой степени, что они разрушаются или разрываются, высвобождая содержимое клеток и ДНК для анализа. Кроме того, ЭДТА защищает и сохраняет целостность ДНК путем ингибирования ферментов, которые обычно присутствуют в клетке, которые могут фрагментировать ДНК и сделать ее непригодной для использования.
Magneisum Chloride для амплификации ДНК
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) - это сложный метод анализа, используемый для амплификации нескольких тысяч копий молекулы ДНК, однако он чреват техническими проблемами и неточностями. Поэтому многие ученые регулярно проводят несколько различных наборов ПЦР, чтобы найти наиболее оптимальные условия и параметры для конкретного интересующего гена. Одним из химических веществ, используемых для проведения такой оптимизации, является магний, который стабилизирует фермент ДНК-полимеразы, используемый в ПЦР, и действует как существенный кофактор для активности фермента. Для ПЦР магний используется в форме буфера хлорида магния.
Этидий бромид для окрашивания ДНК
Бромид этидия - это краситель, который связывается с ДНК, проскальзывая между нуклеотидами, образующими двойную спираль ДНК, в процессе, известном как интеркаляция. Затем этот краситель можно осветить ультрафиолетовой лампой, чтобы можно было визуализировать ДНК, с которой связан бромид этидия. Однако для того, чтобы бромид этидия был виден правильно, требуется по крайней мере 1 нанограмм ДНК, поэтому это один из способов обнаружения ДНК, амплифицированной в ПЦР. Хотя это дешевое и широко используемое вещество, оно также является мутагенным химическим веществом, вызывающим рак, поэтому его применение в лабораториях строго регламентировано, и многие ученые переходят на использование менее токсичных альтернатив.