Химики используют высокоэффективную жидкостную хроматографию или ВЭЖХ для разделения смесей соединений. Как правило, метод состоит в том, что образец вводят в колонку, где он смешивается с одним или несколькими растворителями. Различные соединения адсорбируют или «прилипают» к колонке в разной степени; и когда растворитель проталкивает соединения через колонку, один из компонентов смеси сначала выйдет из колонки. Прибор обнаруживает соединения по мере их выхода из колонки и создает хроматограмму, которая состоит из графика с временем удерживания на оси x и интенсивностью сигнала от детектора на оси y. Когда соединения выходят из колонки, они дают «пики» на хроматограмме. В общем, чем дальше друг от друга и чем уже пики на хроматограмме, тем выше разрешение. Ученые считают, что разрешение 1,0 или выше представляет адекватное разделение.
Измерьте ширину двух соседних пиков на хроматограмме, отметив, где значения оси X находятся у основания каждого пика. Ось X представляет время удерживания, обычно измеряемое в секундах. Таким образом, если пик начинается в 15,1 секунды и заканчивается в 18,5 секунды, его ширина составляет (18,5-15,1) = 3,4 секунды.
Определите время удерживания, отметив время, то есть местоположение на оси x, которое соответствует местоположениям максимумов пиков. Это значение обычно будет примерно посередине между двумя значениями, используемыми для вычисления ширины на шаге 1. Например, пример, приведенный на шаге 1, будет иметь максимум около 16,8 секунд.
Рассчитайте разрешение R между двумя пиками по
R = (RT1 - RT2) /,
где RT1 и RT2 представляют времена удержания пиков 1 и 2, а W1 и W2 представляют ширины пиков, взятых у их оснований. Продолжая пример с этапов 2 и 3, один пик демонстрирует время удерживания 16,8 секунды и ширину 3,4 секунды. Если бы второй пик показал время удержания 21,4 секунды при ширине 3,6 секунды, тогда разрешение будет
R = (21,4 - 16,8) / = 4,6 / 3,5 = 1,3.